Tirzepatid-Verunreinigungen

Tirzepatid-Verunreinigungen|Tilpeptid-Verunreinigungskontrolle|Kundenspezifische Synthese und Strukturbestätigung von Verunreinigungen|Wissenschaft-Peptid

Kontrolle von Tirzepatid-Verunreinigungen - für GLP-1/GIP-Dual--Arzneimittelqualitätsforschung, generische Arzneimittelberichterstattung. Science-Peptide bietet kundenspezifische Synthese von Tilpeptid-bezogenen Verunreinigungen, einschließlich Deletionspeptiden, oxidierten Verunreinigungen, Fettsäure-Peeling-Produkten, Dimeren usw., mit strukturellen Bestätigungsdaten zur Unterstützung Ihrer Verunreinigungen. Wir können Sie bei Ihrer strukturspektroskopischen Studie zu Verunreinigungen unterstützen Bestätigungsdaten. Nehmen Sie gerne Kontakt mit uns auf.

Tirzepatide (Tirzepatide) ist der GLP-1/GIP-Doppelagonist, den Eli Lilly entwickelt hat und der seit zwei Jahren auf Hochtouren läuft. Es hat eine gute zuckersenkende Wirkung und eine starke gewichtsreduzierende Wirkung und wird als verbesserte Version des „Wundermittels zur Gewichtsreduktion“ bezeichnet. Viele inländische Hersteller von Peptid-Generika stehen vor der Tür: Wer kann nach Ablauf des Patents als Erster die Qualität der Forschung prüfen, wer wird die Möglichkeit haben, sich das erste Generikum zu schnappen.

 

Allerdings ist die Qualität von Tilpeptid nicht so einfach zu untersuchen. Es ist komplexer als Simethicon und besteht aus 39 Aminosäuren, einer Fettsäureseitenkette (Eicosandisäure) und einem Linker. Die Verunreinigungen, die während des Syntheseprozesses auftreten können, sind viel höher als bei gewöhnlichen Peptiden. Fehlende Peptide, oxidative Verunreinigungen, Fettsäureabbauprodukte, Dimere und Linker--bedingte Verunreinigungen müssen jeweils kontrolliert werden und müssen klar sein.

 

Wir haben viel Erfahrung in der Synthese komplexer Peptidverunreinigungen gesammelt. Wir haben uns auf die Untersuchung von Tilpeptiden spezialisiert und wissen, welche Schwierigkeiten es bei seinem Verunreinigungsprofil gibt und welche wesentlichen Kontrollelemente es gibt. Wir können die Synthese verschiedener Tilpeptid-Verunreinigungskontrollen mit Strukturbestätigungsdaten an Ihre Bedürfnisse anpassen und Ihnen bei der Festlegung der Methode helfen, sodass die Wahrscheinlichkeit geringer ist, dass Ihnen bei der Einreichung ein Nachtrag ausgestellt wird.

Die molekulare Struktur von Tilpeptid bestimmt, dass sein Verunreinigungsprofil viel komplexer ist als das allgemeiner Peptide. Wenn wir Verunreinigungsstudien durchführen, konzentrieren wir uns hauptsächlich auf diese Kategorien:

Fehlendes Peptid
Die 39 Aminosäuren, von denen jede bei der Synthese fehlt, sind eine Verunreinigung. Die Retentionszeiten der fehlenden Peptide bei HPLC waren weit verteilt, mit unterschiedlicher Polarität der fehlenden Peptide an verschiedenen Positionen. Einige fehlen am N--Terminus, einige in der Mitte und einige in der Nähe der Bindungsstelle der Fettsäure. Wir haben von einem Kunden einen Auftrag über 15 fehlende Peptide an verschiedenen Positionen erhalten, um alle möglichen fehlenden Verunreinigungen in seinem Prozess zu lokalisieren.

Oxidierende Verunreinigungen
Met in der Tilpeptidsequenz ist anfällig für die Oxidation zu Sulfoxid und dann zu Sulfon. In Stabilitätsstudien treten häufig oxidierte Verunreinigungen auf, die sich nach einiger Zeit vermehren. Wir haben einen Vergleich durchgeführt: Unter beschleunigten Bedingungen über einen Monat hinweg kann der Oxidationspeak unkontrolliert auf über 0,3 % ansteigen.

Produkte zum Fettsäureabbau
Dies ist eine Verunreinigung, die nur bei Tilpeptiden vorkommt. Seine Fettsäureseitenkette (Eicosandisäure) ist über einen Linker an Lysin gebunden. Diese Modifikation kann während der Synthese oder Lagerung teilweise abgespalten werden, was zur Entfernung von Verunreinigungen durch die Fettsäure führt. Noch problematischer ist, dass die Abspaltung an unterschiedlichen Stellen - zwischen der Fettsäure und dem Linker oder zwischen dem Linker und dem Peptid - erfolgen kann, was zu unterschiedlichen Verunreinigungen führt. Wir haben für unsere Kunden mehrere mit Fettsäuren verbundene Verunreinigungen synthetisiert, die von der vollständigen Entfernung bis hin zu nur einem kleinen Teil reichen.

Dimere/Polymere
Zwei oder mehr Tilpeptidmoleküle gruppieren sich zu einem Dimer oder höher. Das Molekulargewicht des Dimers ist doppelt so hoch wie das des Hauptpeaks und bei der HPLC handelt es sich häufig um einen breiten Peak. Daher muss es speziell abgetrennt und gereinigt werden, bevor es als Kontrolle verwendet werden kann. Wir haben Dimere hergestellt und es waren mehrere Reinigungsrunden erforderlich, um eine Reinheit von mehr als 95 % zu erreichen.

Linker-bedingte Verunreinigungen
Die Fettsäuremodifikation von Tilpeptiden verwendet einen Linker (z. B. -Glu, PEG usw.), und dieser Linker selbst kann während der Synthese Nebenreaktionen hervorrufen, die zu Verunreinigungen mit fehlenden oder unvollständigen Linkern führen. Diese Art von Verunreinigung kommt in gewöhnlichen Peptiden nicht vor, ist aber einzigartig bei Tilpeptiden und muss speziell untersucht werden.

Desamidierte Verunreinigungen
Asparagin (Asn) und Glutamin (Gln) werden unter sauren oder erhitzten Bedingungen leicht desamidiert, was zu Isomeren führt. Es gibt mehrere Asn und Gln in der Tilpeptidsequenz, und die Desamidierungsverunreinigung erscheint häufig im forcierten Abbautest, sodass das Kontrollprodukt verwendet werden muss, um die Verunreinigung zu lokalisieren.

Diastereoisomere
Während der Langkettensynthese kann es zu einer Racemisierung einzelner Aminosäuren kommen, was zu Diastereoisomeren führt. Der Gehalt dieser Art von Verunreinigung ist normalerweise nicht hoch, aber Experten werden bei der Deklaration nachfragen und es ist besser, ein Kontrollprodukt zur Bestätigung zu haben.

Viele dieser Verunreinigungen sind nicht käuflich zu erwerben und müssen individuell synthetisiert werden. Wir haben viele Projekte zur individuellen Anpassung von Tilpeptid-Verunreinigungen durchgeführt, die alle oben genannten Kategorien abdecken.

Die Löschung der Peptidreihe
We synthesize whatever is missing. For example, the lysine at position 20 is missing, or the amino acid near the fatty acid attachment site is missing. We will synthesize according to your process impurity profile, and the purity is usually >95 %, mit MS- und NMR-Bestätigung. Wir haben eine Reihe von Peptiden mit einem Abstand von 5 Aminosäuren vom N--Terminus zum C--Terminal synthetisiert.

Oxidierende Verunreinigungen
Met in Tilpeptide is oxidized to sulfoxide or sulfone, and we can control the oxidation conditions and synthesize the oxidized control product. We can control the oxidation conditions and synthesize the oxidized control. The purity is >95 % und wir können das LC-MS-Spektrum zur Verfügung stellen, um den Oxidationsgrad zu bestätigen. Sulfoxid und Sulfon werden durch HPLC getrennt, und wir können beides tun.

Produkte zum Fettsäureabbau
Dies ist eine der am schwierigsten zu bearbeitenden Verunreinigungen im Tilpeptid. Die Fettsäurekette kann vollständig oder teilweise fehlen (z. B. fehlen die letzten Kohlenstoffatome). Wir können eine Reihe von Varianten für verschiedene Positionen der Kette synthetisieren. In einem der kompliziertesten Projekte, die wir je durchgeführt haben, bat uns der Kunde, eine Verunreinigung mit 8 fehlenden Kohlenstoffatomen in der Fettsäurekette zu synthetisieren, und wir brauchten zwei Monate, um es richtig zu machen.

Dimer
Dimere, die durch Vernetzung oder nicht{1}kovalente Wechselwirkungen gebildet werden, können mit verschiedenen Methoden hergestellt und isoliert und gereinigt werden, um hochreine Kontrollen bereitzustellen. Die Reinigung von Dimeren ist aufwändig, aber wir haben die Erfahrung, wie man die Monomere trennt.

Linker-bedingte Verunreinigungen
Der Linker (-Glu, PEG usw.) kann fehlen oder unvollständig sein, was zu einer Reihe damit verbundener Verunreinigungen führt. Wir können verschiedene Varianten mit fehlenden Linkern, verkürzten Linkern oder nicht übereinstimmenden Linkern synthetisieren und Ihnen bei der Erstellung der Spektren solcher Verunreinigungen helfen.

Desamidierte Verunreinigungen
Für die Asn- und Gln-Stellen in der Sequenz können wir desamidierte Verunreinigungskontrollen durch erzwungenen Abbau oder gezielte Synthese herstellen. Der Unterschied im Molekulargewicht nach der Desamidierung beträgt nur 1, was durch MS nicht leicht zu unterscheiden ist, daher verwenden wir zur Bestätigung normalerweise NMR oder spezielle chromatographische Bedingungen.

Andere kundenspezifische Verunreinigungen
Wenn Sie bei Ihrer Forschung eine neue unbekannte Verunreinigung finden, können wir Ihnen bei der Analyse der Struktur und der Synthese helfen. Senden Sie uns die Proben, wir führen eine LC-MS-Analyse durch, leiten die Struktur ab, führen dann eine Richtungssynthese durch und vergleichen dann die Retentionszeit und das Massenspektrum, um die Übereinstimmung zu bestätigen. Wir haben diesen Prozess viele Male durchgeführt und die Erfolgsquote ist ziemlich hoch.

Entwicklung und Validierung analytischer Methoden
Beim Einrichten einer HPLC- oder LC{0}}MS-Methode ist eine Verunreinigungskontrolle zur Lokalisierung, Bestimmung der Trennung, Überprüfung des linearen Bereichs und der Wiederfindung erforderlich. Ohne die Kontrolle fehlt der Methodenvalidierung ein Teil. Viele Kunden bitten uns, zunächst einige wichtige Verunreinigungen zu entfernen, um die Methode einzurichten, und den Rest dann langsam nachzuholen.

Heterogene Massenspektrometrie
Bei der Deklaration eines Generikums ist eine umfassende qualitative und quantitative Analyse der Prozessverunreinigungen und Abbauprodukte erforderlich. Ort, Inhalt und Struktur jeder Verunreinigung müssen durch ein Kontrollprodukt bestätigt werden. Wir haben gesehen, dass die Erklärung der Informationen, die zum Ausfüllen gesendet wurden, in neun von zehn Fällen die Unreinheiten dieses Stücks nicht verstanden hat.

Stabilitätsstudien
Bei Langzeitstabilitäts- und beschleunigten Tests muss ermittelt werden, welche Abbauprodukte dominant sind und wie der Trend beim Inhalt aussieht. Mit der Verunreinigungskontrolle können wir genau quantifizieren und überwachen. Ein Kunde untersuchte die Stabilität einer Tilpeptid-Zubereitung und stellte fest, dass ein Abbaupeak unter beschleunigten Bedingungen sehr schnell zunahm. Deshalb analysierten und synthetisierten wir ihn mittels MS, um die Struktur zu bestätigen, und der Kunde war dann erleichtert, dies zu melden.

Prüfung der Chargenfreigabe
Nach der Kommerzialisierung muss jede Charge eines Wirkstoffs oder jeder Formulierung auf den betreffenden Stoff getestet werden. Verunreinigungskontrollen sind wesentliche Werkzeuge für Freigabetests.

Informationen zu Generika-Deklarationen
Verunreinigungsstudien sind ein wichtiger Abschnitt der Anmeldeinformationen. Durch die Bereitstellung vollständiger Verunreinigungsprofilierungs- und Kontrolldaten wird das Risiko einer Überprüfungsfreigabe erheblich verringert.

Fall 1: Ein Pharmaunternehmen, Tilpeptid-Generikaprogramm
Sie entwickeln eine generische Version von Tilpeptid und benötigen für die Methodenvalidierung einen vollständigen Satz an Verunreinigungskontrollen. Wir haben 12 Verunreinigungen für sie angepasst: 5 fehlende Peptide, 2 oxidierte Verunreinigungen, 1 Dimer, 2 Fettsäureabspaltungsprodukte und 2 Linker-bedingte Verunreinigungen. Jeder von ihnen hat eine Reinheit von mehr als 95 % und wird von MS- und NMR-Daten begleitet. Der Projektleiter sagte: „Die Verunreinigungen von Tilpeptid sind doppelt so hoch wie bei anderen Peptiden, aber man kann sie alle herstellen und die Daten sind vollständig, was uns viel Arbeit erspart.“ Später wurde die Validierung ihrer Methode erfolgreich abgeschlossen und nun bereiten sie sich auf die Deklaration vor.

Fall 2: Ein CRO-Unternehmen, Verunreinigungsprofilierung
Sie führten ein hochwertiges Forschungsprojekt zu Tilpeptiden durch, das eine umfassende Analyse der Prozessverunreinigungen erforderte. Sie schickten uns die rohen Peptidproben, und wir führten eine LC-MS-Analyse durch, leiteten die möglichen Strukturen mehrerer unbekannter Verunreinigungen ab, synthetisierten sie dann gezielt, verglichen Retentionszeiten und Massenspektren und bestätigten vier neue Verunreinigungen - zwei davon waren mit Linkern- verbunden und zwei davon waren Varianten der Fettsäureabspaltung. Der Kunde nutzte diese Daten zur Verfeinerung der Verunreinigungsprofile und bestand die Abnahme erfolgreich.

Fall 3: Stabilitätsstudien, ein Biotechnologieunternehmen
Sie untersuchten die Stabilität einer Tilpeptid-Formulierung und stellten fest, dass die Menge eines Abbauprodukts unter beschleunigten Bedingungen schnell anstieg, wussten jedoch nicht, um welches es sich handelte. Wir haben die Probe mittels LC-MS analysiert und angenommen, dass es sich um eine Desamidierungsverunreinigung an einer bestimmten Asn-Stelle handelt, diese dann gezielt synthetisiert und durch Vergleich bestätigt. Mithilfe dieser Kontrolle erstellten sie einen Test und überwachten genau den Trend des Abbauprodukts. Später, als sie den Bericht vorlegten, betonten die Experten diesen Teil der Daten und aufgrund der soliden Daten wurde keine Entschädigung gewährt.

Tilpeptid ist ein beliebtes Produkt, aber die Untersuchung von Verunreinigungen ist eine heikle Aufgabe, insbesondere bei Fettsäure-Peelingprodukten und Linker-bedingten Verunreinigungen, mit denen viele Hersteller nicht umgehen können. Wenn Sie Qualitätsforschung oder generische Entwicklung von Tilpeptid betreiben und eine Kontrolle der Verunreinigungen benötigen, können Sie sich gerne an uns wenden. Wir haben viel Arbeit geleistet, wir kennen die Schwierigkeiten und wissen, wie wir sie überwinden können.